采用 Cary 8454 和 Cary 60 紫外-可見 分光光度計

進行測定的比較

前言

方法開發(fā)和驗證用于證明所有新儀器在現有儀器的操作范圍和可接受標準內，能夠 提供相同的結果。將方法從一臺儀器轉移至另一臺儀器時，驗證要求取決于 GMP 指 南，來確保結果的一致性和重現性。

本研究展示了在使用紫外-可見 ChemStation 軟件的 Cary 8454 紫外-可見分光光度計 與使用 Cary WinUV 軟件的 Cary 60 紫外-可見分光光度計之間的方法轉移。同時通過 對比證明了兩種分光光度計系統(tǒng)結果的準確性和重現性。方法的任何其他驗證要求 均需要滿足法規(guī)指南和可接受標準。

實驗部分

設備

–     Cary 8454 紫外-可見分光光度計

–     紫外-可見 ChemStation 軟件

–     Cary 60 紫外-可見分光光度計

–     Cary WinUV 軟件

試劑

–      空白溶液：    0.00 mg/L 高氯酸空白

–      標準溶液：    40 mg/L、80 mg/L 和 120 mg/L 重鉻酸鉀

–      樣品溶液：    約 75 mg/L 重鉻酸鉀

第 1 部分：確定分析波長

使用 40 mg/L 的重鉻酸鉀樣品確定合適的波長，并使用 Cary  8454 和 Cary 60 紫外-可見分光光度計在該波長下生成校準曲線。

儀器參數：Cary 8454

–      ChemStation 軟件：    標準模式，光譜/峰任務

–      波長顯示：                  200–800 nm

–      積分時間：                 0.5 秒

–      峰/峰谷查找：             查找并標注最多兩個峰

儀器參數：Cary 60

–      WinUV 軟件：             “掃描"應用程序

–      波長顯示：                  200–800 nm

–      掃描速度：                  高級設置：數據間隔 3 nm

–      基線：                        所選校正

–      峰信息：                      峰閾值 0.010 ，X 標注（圖 1）

圖 1. 在 Cary WinUV 設置菜單中設置峰標注

方法

開啟 Cary 8454 紫外-可見分光光度計，將燈預熱一小時。在 預熱過程中，打開紫外-可見 ChemStation 軟件，選擇“標準 模式"進行分析并輸入參數。預熱后，使用高氯酸空白進行空 白讀數。使用 40 mg/L 高氯酸溶液采集單個光譜， 從而確定 分析波長。

Cary 60 紫外-可見分光光度計不需要預熱。打開 Cary WinUV 軟件，選擇“掃描"應用程序并輸入參數。使用高氯酸空白進 行基線采集，然后采集 40 mg/L 重鉻酸鉀溶液的掃描結果。

結果

在 Cary 8454 紫外-可見分光光度計和 Cary 60 分光光度計上采 集的重鉻酸鉀譜圖具有高度重現性，且在 257 nm 和 350 nm 處鑒定出了相同的峰（圖 2a 和 2b）。

圖 2a. 展示重鉻酸鉀光譜的紫外-可見 ChemStation 軟件，圖中在 257 nm 和

350 nm 處鑒定出兩個峰。采集自 Cary 8454 紫外-可見分光光度計

圖 2b. 展示重鉻酸鉀光譜的 Cary WinUV 軟件，圖中在 257 nm 和 350 nm 處 鑒定出兩個峰。采集自 Cary 60 分光光度計

第 2 部分：確定未知樣品濃度

在 Cary 8454 紫外-可見分光光度計和 Cary 60 中使用三種重 鉻酸鉀標準溶液生成校準曲線。選擇的分析波長為 350 nm。

儀器參數：Cary 8454（圖 3）

–      ChemStation 軟件：      標準模式，定量分析任務

–      波長：                           350 nm

–      背景校正：                    無

–      校準曲線類型：            線性

–      重量：                           單位為 mg/L 與體積校正

–      提示：                          用于標準品和樣品信息

圖 3. 紫外-可見 ChemStation 標準模式定量分析任務中的方法參數

儀器參數：Cary 60（圖 4）

–      WinUV 軟件：      “濃度"應用程序

–      波長：                 350 nm

–      標準品設置：       單位為 mg/L ，3 種標準品，線性擬合

–      重復次數：           2 次

圖 4. Cary WinUV“濃度"應用程序設置菜單中的方法參數

方法

在兩種儀器中均使用高氯酸空白進行空白讀數。對 40 mg/L、 80 mg/L 和 120 mg/L 高氯酸溶液進行單次測定，生成校準曲 線。然后對未知樣品進行測定。

結果

根據生成的一條校準曲線，使用 Cary 8454 紫外-可見分光光 度計測定的未知重鉻酸鉀溶液的濃度為 77.5 mg/L（圖 5）， 使用 Cary 60 測定的濃度為 77.4 mg/L（圖 6），表明兩種系統(tǒng) 能夠獲得相當的結果。

圖 5. 展示樣品/結果表的紫外-可見 ChemStation 軟件，其中未知重鉻酸鉀樣品 濃度為 77.5 mg/L

圖 6. Cary WinUV 軟件濃度應用程序分析報告，展示重鉻酸鉀未知樣品（樣品 1） 的濃度為 77.4 mg/L

結論

Cary 8454 紫外-可見分光光度計和 Cary 60 系統(tǒng)均分析快速且 簡單易用。如本研究所示，兩種系統(tǒng)均有可輕松進行方法開發(fā) 的軟件，能夠實現常規(guī)紫外-可見方法的快速設置。

從 Cary 8454 紫外-可見分光光度計到 Cary 60 紫外-可見分光 光度計的兩種方法的轉移結果證明，可實現重現性峰采集以及 準確的標準品和樣品測定。

本研究分析結果表明，Cary 60 紫外-可見分光光度計（也支持 可選的 21 CFR Part 11 軟件工具）的性能，可確保法規(guī) 監(jiān)管實驗室在使用 Cary 60 執(zhí)行之前為 8453 或 8454 儀器開 發(fā)的方法時充滿信心。